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NobleRyder SDS裂解液

  • 型   號:P4815
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-09-26
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

NobleRyder SDS裂解液
NobleRyder SDS裂解液 即用型液體試劑 P4815-100ml

SDS裂解液

產(chǎn)品簡介:

多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一種極其強烈的細(xì)胞組織快速裂解液并獲得總蛋白質(zhì)。其裂解液強度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、通用細(xì)胞裂解液、Western及IP細(xì)胞裂解液,所獲得的蛋白質(zhì)可以用于Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等。
      SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

 NobleRyder  SDS裂解液 

產(chǎn)品組成:

                      編號

名稱

P4815

Storage

SDS Lysis Buffer

100ml

-20℃

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用說明書

1份

 

操作步驟(僅供參考)

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

去除培養(yǎng)液,用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。

按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入riton-SDS Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于細(xì)胞1~3s內(nèi),細(xì)胞就會被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃裂解15~30min。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。

10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后,使用前取適量裂解液加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。

用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。通常裂解液作用于細(xì)胞1~3s內(nèi),細(xì)胞就會被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 置于冰上或4℃裂解15~30min。

10000~12000g, 4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。

(三)組織樣本

SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后,使用前取適量裂解液加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

把組織jian切成細(xì)小的碎片,越小越好。

取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃繼續(xù)裂解10~20min。

10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。

 

注意事項:

去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。

如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中,如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬細(xì)胞/離心管,然后再裂解。少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。

如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

溶解SDS Lysis Buffer時,應(yīng)盡量縮短溶解時間,避免裂解液中的有效成分失效。

細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)置于冰上或4℃進行。

 

有效期: 12個月有效。

NobleRyder  SDS裂解液 

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