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NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液

  • 型   號(hào):P4817
  • 價(jià)   格:
  • 更新時(shí)間:2024-09-26
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液 即用型液體試劑 P4817-100ml

Triton-SDS細(xì)胞裂解液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Triton-SDS細(xì)胞裂解液 Triton X-100、SDS、Tris-HCl等組成,并含有蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。作用原理是利用Triton X-100破壞脂質(zhì)雙分子層,溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜,破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原。其濃度在0.1%~1%時(shí)即可滿足幾乎所有溶解的需求,且可補(bǔ)充等離子濃度的鹽及使pH接近中性。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。不宜用Bradford法測(cè)定由Triton-SDS細(xì)胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度。

 NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液 

產(chǎn)品組成:

                      編號(hào)

名稱

P4817

Storage

Triton-SDS Lysis Buffer

100ml

-20℃

PMSF(100mM)

1.5ml

-20℃

使用說(shuō)明書

1份

 

操作步驟(僅供參考)

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

去除培養(yǎng)液,用PBS、NS或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。

按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入riton-SDS Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于細(xì)胞1~3s內(nèi),細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。

10000~12000g,4℃離心5~10min(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。

用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入Triton-SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200~250μl。

10000~12000g, 4℃離心5~10min(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

Triton-SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。

把組織jian切成細(xì)小的碎片,越小越好。

取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過(guò)程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。

步驟3、4亦可以采用如下過(guò)程:按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton-SDS Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過(guò)程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

10000~12000g,4℃離心5~10min(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事項(xiàng):

去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。

如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬(wàn)細(xì)胞/離心管,然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分,而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對(duì)比較容易裂解充分。

如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

溶解Triton-SDS Lysis Buffer時(shí),應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間,避免裂解液中的有效成分失效。

裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行。

 

有效期: 12個(gè)月有效。

NobleRyder Triton-SDS細(xì)胞裂解液 

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